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板块：中医百科   类别：中国药典   分类：第一部

本品为兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、霍山石斛Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng、鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.或流苏石斛Dendrobium fimbriatum Hook.的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥茎。全年均可采收，鲜用者除去根和泥沙；干用者采收后，除去杂质，用开水略烫或烘软，再边搓边烘晒，至叶鞘搓净，干燥。霍山石斛11月至翌年3月采收，除去叶、根须及泥沙等杂质，洗净，鲜用，或加热除去叶鞘制成干条；或边加热边扭成螺旋状或弹簧状，干燥，称霍山石斛枫斗。

【性状】

鲜石斛呈圆柱形或扁圆柱形，长约30cm，直径0.4～1.2cm。表面黄绿色，光滑或有纵纹，节明显，色较深，节上有膜质叶鞘。肉质多汁，易折断。气微，味微苦而回甜，嚼之有黏性。

金钗石斛　呈扁圆柱形，长20～40cm，直径0.4～0.6cm，节间长2.5～3cm。表面金黄色或黄中带绿色，有深纵沟。质硬而脆，断面较平坦而疏松。气微，味苦。

霍山石斛　干条呈直条状或不规则弯曲形，长2～8cm，直径1～4mm。表面淡黄绿色至黄绿色，偶有黄褐色斑块，有细纵纹，节明显，节上有的可见残留的灰白色膜质叶鞘；一端可见茎基部残留的短须根或须根痕，另一端为茎尖，较细。质硬而脆，易折断，断面平坦，灰黄色至灰绿色，略角质状。气微，味淡，嚼之有黏性。鲜品稍肥大。肉质，易折断，断面淡黄绿色至深绿色。气微，味淡，嚼之有黏性且少有渣。枫斗呈螺旋形或弹簧状，通常为2～5个旋纹，茎拉直后性状同干条。

鼓槌石斛　呈粗纺锤形，中部直径1～3cm，具3～7节。表面光滑，金黄色，有明显凸起的棱。质轻而松脆，断面海绵状。气微，味淡，嚼之有黏性。

流苏石斛等　呈长圆柱形，长20～150cm，直径0.4～1.2cm，节明显，节间长2～6cm。表面黄色至暗黄色，有深纵槽。质疏松，断面平坦或呈纤维性。味淡或微苦，嚼之有黏性。

【鉴别】

（1）本品横切面：金钗石斛　表皮细胞1列，扁平，外被鲜黄色角质层。基本组织细胞大小较悬殊，有壁孔，散在多数外韧型维管束，排成7～8圈。维管束外侧纤维束新月形或半圆形，其外侧薄壁细胞有的含类圆形硅质块，木质部有1～3个导管直径较大。含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁。

霍山石斛　表皮细胞1列，扁平，外壁及侧壁稍增厚，微木化，外被黄色或橘黄色角质层，有的外层可见无色的薄壁细胞组成的叶鞘层。基本薄壁组织细胞多角形，大小相似，其间散在9～47个维管束，近维管束处薄壁细胞较小，维管束为有限外韧型，维管束鞘纤维群呈单帽状，偶成双帽状，纤维1～2列，外侧纤维直径通常小于内侧纤维，有的外侧小型薄壁细胞中含有硅质块。草酸钙针晶束多见于近表皮处薄壁细胞或近表皮处维管束旁的薄壁细胞中。

鼓槌石斛　表皮细胞扁平，外壁及侧壁增厚，胞腔狭长形；角质层淡黄色。基本组织细胞大小差异较显著。多数外韧型维管束略排成10～12圈。木质部导管大小近似。有的可见含草酸钙针晶束细胞。

流苏石斛等　表皮细胞扁圆形或类方形，壁增厚或不增厚。基本组织细胞大小相近或有差异，散列多数外韧型维管束，略排成数圈。维管束外侧纤维束新月形或呈帽状，其外缘小细胞有的含硅质块；内侧纤维束无或有，有的内外侧纤维束连接成鞘。有的薄壁细胞中含草酸钙针晶束和淀粉粒。

粉末灰绿色或灰黄色。角质层碎片黄色；表皮细胞表面观呈长多角形或类多角形，垂周壁连珠状增厚。束鞘纤维成束或离散，长梭形或细长，壁较厚，纹孔稀少，周围具排成纵行的含硅质块的小细胞。木纤维细长，末端尖或钝圆，壁稍厚。网纹导管、梯纹导管或具缘纹孔导管直径12～50μm。草酸钙针晶成束或散在。

（2）金钗石斛　取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取石斛碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（7:3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

霍山石斛　取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末（过二号筛）1g，加无水甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水15ml使溶解，用石油醚（60～90℃）洗涤2次，每次20ml，弃去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗涤2次，每次20ml，弃去乙酸乙酯液，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加无水甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取霍山石斛对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取夏佛塔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各3～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水（4:4:1:17）为展开剂，20℃以下展开，取出，晾干，在105℃烘干，取出，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，取出，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

鼓槌石斛　取鼓槌石斛〔含量测定〕项下的续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取毛兰素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5～10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3:2）为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

流苏石斛等　取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末0.5g，加甲醇25ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取石斛酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述供试品溶液5～10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3:2）为展开剂，展开，展距8cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）霍山石斛　聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。

模板DNA提取　取本品0.1g（鲜品干燥），加液氮适量研磨，过五号筛。取粉末25mg，置1.5ml离心管中，加入CTAB沉淀液[2%十六烷基三甲基溴化铵，100mmol/L Tris-盐酸pH＝8.0，10mmol/L乙二胺四乙酸二钠]1000μl，涡旋震荡，65℃水浴加热20分钟（中间震荡混匀3次），离心（转速为每分钟12000转）10分钟，弃去上清液；再加入CTAB沉淀液1000μl，涡旋震荡，65℃水浴加热10分钟，离心（转速为每分钟12000转）10分钟，弃去上清液；再同法操作一次；弃去上清液，加入CTAB提取液[2%十六烷基三甲基溴化铵，100mmol/L Tris-盐酸pH＝8.0，20mmol/L乙二胺四乙酸二钠，2.5mol/L氯化钠]900μl、蛋白酶K（20mg/ml）5μl充分混匀，65℃水浴加热30分钟，离心（转速为每分钟12000转）10分钟，吸取上清液置另一2.0ml离心管中；加入900μl三氯甲烷-异戊醇（体积比24:1）溶液，充分混匀，离心（转速为每分钟12000转）10分钟；取上清液，加入等体积三氯甲烷-异戊醇（体积比24:1）溶液（约800μl），充分混匀，离心（转速为每分钟12000转）10分钟；取上清液置另一2.0ml离心管中，加入2/3体积的异丙醇，置－20℃放置30分钟；离心（转速为每分钟12000转）10分钟，弃去上清液；沉淀加70%乙醇500μl震荡1分钟，离心（转速为每分钟12000转）3分钟；弃去上清液，沉淀再用70%乙醇500μl震荡1分钟，离心（转速为每分钟12000转）3分钟；弃去上清液，置37℃水浴中挥干溶剂；加入高压灭菌超纯水50μl，溶解，作为供试品溶液，置4℃冰箱中备用。另取霍山石斛对照药材0.1g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

PCR-RFLP反应　鉴别引物：5′-ATTCTTCATCAAGTTTAGTGCATTC-3′和5′-AGAGCTGATGGGCCTTTGA-3′。PCR反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为25μl，反应体系包括10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP（10mmol/L）1μl，鉴别引物（10μmol/L）各0.2μl，Taq DNA聚合酶（5U/μl）0.2μl，10mg/ml牛血清蛋白1μl，25%聚乙烯吡咯烷酮1μl，模板1μl，无菌超纯水18.4μl。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95℃预变性5分钟，循环反应40次（95℃10秒，56℃20秒，72℃20秒），72℃延伸5分钟。取PCR反应液，置200μl离心管中，进行酶切反应，反应总体积为20μl，反应体系包括10×酶切缓冲液2μl，PCR反应液17.5μl，Alu I内切酶（10U/μl）0.5μl，酶切反应在37℃水浴反应30分钟。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RFLP反应操作，作为空白对照。

电泳检测　照琼脂糖凝胶电泳法（通则0541），胶浓度为2.5%，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；以DL500作为DNA分子量标记，供试品与对照药材PCR产物和酶切反应产物的上样量分别各8μl，DNA分子量标记上样量为2μl（0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。霍山石斛供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应位置上，在100～200bp间应有单一DNA条带，且PCR产物与酶切产物条带位置一致。空白对照无条带。

【特征图谱】

霍山石斛　照高效液相色谱法（通则0512测定）。

色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇溶液（1:1）为流动相A，0.01mol/L乙酸铵溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml；柱温40℃；检测波长为340nm。理论板数按夏佛塔苷峰计算应不低于5000。