矛头蝮蛇血凝酶-小库网

板块：中医百科   类别：中国药典第二部   分类：品种正文　第一部分

本品系从矛头蝮蛇（Bothrops Atrox）蛇毒中提取的具有止血作用的蛋白酶类物质。每1mg中含矛头蝮蛇血凝酶活力不得少于800单位，每1mg蛋白质中含矛头蝮蛇血凝酶活力不得少于2500单位。

【制法要求】

本品系从检验合格的矛头蝮蛇蛇毒（见附）中经透析、特异性亲和色谱等多种色谱方法分离提取，并经冷冻干燥制得。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。

【性状】

本品为白色冻干块状物或粉末；无味。

本品在水中易溶。

【鉴别】

（1）取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含100μg的溶液，作为供试品溶液；取小试管，加入凝血质控血浆混悬液［凝血质控血浆（MDC Hemostasis）放至室温，每支加水1.0ml，放置15分钟，期间间或轻摇，每次使用前轻轻摇匀］0.2ml，置37℃±0.5℃水浴中2分钟，加供试品溶液0.2ml，置37℃±0.5℃水浴中振摇，观察，血浆应在10秒内出现白色絮团。

（2）取试管1支，加0.4mol/L碳酸钠溶液1ml、鉴别（1）项下的供试品溶液1ml与0.1mol/L福林试液1ml，置37℃±0.5℃水浴中20分钟，溶液应呈蓝色。

（3）取本品与矛头蝮蛇血凝酶对照品适量，分别加水溶解并制成适宜浓度的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液，依法测定（通则3405第一法），供试品溶液的图谱应与对照品溶液的图谱一致。

（4）照电泳法（通则0541第五法，还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）测定。

取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含蛋白质1mg的溶液，作为供试品储备液；取此储备液30μl，加还原型供试品缓冲液10μl，混匀，置沸水浴中加热5分钟，作为供试品溶液；取矛头蝮蛇血凝酶对照品适量，同法制备对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各15μl，分别加至上样孔，分离胶浓度为12.5%，用考马斯亮蓝R250染色，供试品溶液主带的迁移率应与对照品溶液主带的迁移率一致。

【检查】

纯度　（1）照电泳法（通则0541第五法，非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）测定。

取鉴别（4）项下供试品储备液30μl，加非还原型供试品缓冲液10μl，混匀，置沸水浴中加热5分钟，作为供试品溶液。取供试品溶液15μl，加至上样孔，分离胶浓度为12.5%，用考马斯亮蓝R250染色，应显示一条带。

（2）照高效液相色谱法（通则0512）测定。

供试品溶液　取本品，加流动相A溶解并制成每1ml中约含蛋白质1mg的溶液。

色谱条件　用丁基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%三氟乙酸的0.1%三乙胺水溶液为流动相A，以0.1%三氟乙酸的0.1%三乙胺乙腈溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为280nm；进样体积50μl。